实验用细胞应不超过第12代，并且细胞从液氮取出后至少传代2次再用于实验。

基质胶凝胶期间保证胶面均匀平整，尽量选择更大表面积的孔板。

细胞活率：种细胞时，活率要大于95%

将细胞添加到孔中时，确保细胞混合均匀，因为细胞密度会影响管的形成。

基质胶浓度；最低浓度应不低于10mg/mL， 基质胶的稀释比例是6 mg/mL以上。成管效果最好的是6-8 mg/mL。

取出5mL GelNest™基质胶，置于冰水混合物中。需用碎冰，冰压实后，瓶子正置插入冰中，加水，水面必须没过基质胶液面，请勿将瓶盖接触水面。

然后将带基质胶的冰水混合物放入4℃冰箱过夜（16小时左右），即可达到完全液化的效果。

待基质胶重新液化后，再进行轻微吹打混匀、分装，置于-20℃冰箱进行长期冷藏。

准备1000微升无菌吸头一盒、无菌的1.5mL微量离心管若干，置于无冰冰盒或离心管架。

在分装前将以上耗材均置于-20℃冰箱中预冷一小时以上，防止分装时基质胶受热提前凝固。

分装前将基质胶混匀。完全液化的GelNest™基质胶为可流动液体，应避免有结块的胶存在。

将混匀的基质胶分装于1.5mL微量离心管中。

将分装好的基质胶转移至-20℃（半年内）或-80℃（长期）冰箱中保存。

于-20℃冰箱中取出分装的GelNest™基质胶。

置于冰水浴里，或者0℃金属浴。30分钟左右后，微量离心管里的基质胶就可以从-20℃变为液化状态。

GelNest™基底膜基质是一种从小鼠肿瘤中提取的重组基底膜，新鲜提取的原料中主要包括以下成分：层粘连蛋白60%，IV型胶原30%，巢蛋白8%，硫酸肝素蛋白聚糖2%，表皮生长因子，类胰岛素生长因子，及其他生长因子。

在低温条件（如4℃）下，蛋白质分子间的相互作用较弱，没有足够的能量，分子间非共价键无法形成，分子处于相对自由的状态，所以GelNest™基底膜基质呈现液体流动状态，可进行移液操作和与细胞混合。

在8℃-37℃温度条件下，温度升高导致蛋白质分子构象发生变化，疏水相互作用增强，分子间距离缩短，范德华力维持分子间相互作用，作为交联分子的巢蛋白，连接层粘连蛋白和IV型胶原，蛋白质分子间形成氢键和产生的静电相互作业，共同导致稳定的基底膜结构（凝聚状态）的形成，即促使GelNest™基底膜基质形成凝胶状态。