为什么GelNest的颜色不一样?
因为二氧化碳和碳酸氢盐缓冲液及酚红的反应,冷冻或刚融解的GelNest都有可能呈现不同颜色,颜色从稻草黄到暗红色不等。
酚红在冷冻或者酸性环境下呈现明黄色,在接近生理pH值或0ºC以上呈现红色。GelNest出现颜色上的区别是正常情况,不会影响产品质量,并且在和5%的二氧化碳平衡后,会恢复到统一颜色。
细胞迁移与侵袭有哪些异同点?
相同点:
a.实验方法类似:Transwell实验、Boyden室内迁移实验和划痕实验等
b.都是细胞从一个位置到另一个位置的能力
c.分子机制相似:都涉及细胞骨架的改变、细胞-细胞和细胞-基质作用、信号通路的调控等
不同点:
a.实验操作差异:侵袭实验需要在上室侧铺上一层基质胶,用以模仿体内细胞外基质。
b.调控机制差异:细胞迁移主要受到趋化因子和细胞外基质的影响,细胞通过细胞骨架的改变和膜流动性的调整实现迁移。而细胞侵袭不仅需要对这些信号的响应,还需要细胞能够分泌蛋白酶,降解基底膜,以便成功穿越阻碍物。
c.基质互作差异:细胞迁移过程中,细胞与基质之间的黏附和解除黏附是细胞移动的关键步骤,细胞利用细胞外基质作为支持来推进。细胞侵袭需要细胞分泌蛋白酶来降解基底膜,打开通道,这为细胞穿越提供了必要的条件。
细胞小室Transwell侵袭实验与体内成瘤实验研究的联系是什么?
都是研究肿瘤侵袭、转移技术。Transwell侵袭实验是体外实验,体内成瘤实验是体内实验,多选用4-6周裸鼠。这两种实验都可以被用于研究肿瘤形成及转移的课题。
Transwell侵袭实验,其实是指将Transwell这一技术应用于肿瘤细胞侵袭研究的一种实验。由于其简单易行、重复性好,因而得到了越来越广泛的应用。常用8.0、12.0µm膜,上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,但与肿瘤细胞迁移实验不同的是,聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶,用以模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室,先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解,方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
体内成瘤实验是用免疫缺陷型小鼠来作为移植瘤模型的载体,通过对该小鼠的注射肿瘤细胞,使其成瘤,观察瘤体的生长来判断其生物学变化。可以加基质胶以加速瘤块的生成,基质胶与PBS或无血清的比列为1:1。
为什么选择HUVEC细胞做成血管实验?
通常选用的细胞模型为人脐静脉内皮细胞(HUVEC)原因:
A)来源方便:HUVEC来源于新生儿的脐带组织,容易获取,没有伦理争议,且便于提取足量细胞
B) 具有细胞成管的能力:脐静脉内皮细胞具有干细胞的潜能,理论上可以传代50-60次。
C) 原代HUVEC最接近人自体内皮细胞,体现新生血管内皮的特点。
为什么在成血管前需要饥饿培养HUVEC细胞?
限制细胞对营养元素和增殖因子的需要,从而降低细胞生长速率。
能够诱导细胞停滞在G0/G1期,使细胞同步生长分裂。
刺激细胞凋亡,从而容易观察到细胞形态的变化和分化的过程。